試管嬰兒的步驟因患者的具體情況而有一些差異。它可以是簡單的體外受精和胚胎移植,也可能是體外受精加上其他的輔助生殖技術(shù),如顯微授精、輔助孵化、外科方法取精、卵子的體外成熟、卵子/精子/胚胎冷凍、胚胎著床前診斷等。
試管嬰兒的基本步驟是:讓女性產(chǎn)生數(shù)個卵子,將卵子從卵巢內(nèi)取出,精子從男性取出,在試管嬰兒實驗室里使精子和卵子受精,受精后的卵子體外培養(yǎng)以便選擇好的胚胎用來移植,將胚胎移植到患者的子宮,胚胎移植后的妊娠支持,胚胎移植后的妊娠檢查,妊娠后的胎兒數(shù)日檢查及胚胎著床部位的確定等。
試管嬰兒的操作步驟及程序有以下幾方面:
(1)體外授精前處理及排卵監(jiān)測:為了適時從卵巢采集排卵前成熟或近成熟的卵母細胞,精確地監(jiān)測排卵前卵泡成熟的進程極為重要。利用自然月經(jīng)周期采卵往往只能取到一個卵細胞。為了增加成功的機會,增加發(fā)育卵泡以獲得多個卵子,現(xiàn)多采用有刺激周期方法(也稱促超排卵),一次可取得3個以上的卵母細胞。①自然月經(jīng)周期中進行排卵前監(jiān)測:世界上首例試管嬰兒成功就是用自然周期監(jiān)測排卵期排卵的。通過基礎(chǔ)體溫測定、內(nèi)分泌測定(血雌二醇值、尿中黃體生成素值)和B超的監(jiān)測,配合臨床觀察(宮頸粘液變化等)確定取卵時日。② B超監(jiān)測:應(yīng)與內(nèi)分泌測定密切配合。③促超排卵:目前促超排卵主要有4種方案:克羅米芬—人絕經(jīng)后促性腺激素(HMG)—絨毛膜促性腺激素(HCG);HMG—HCG;促卵泡激素(FSH)—HCG;促性腺激素釋放激素(GnRH)—HMG—HCG。常規(guī)使用克羅米芬—HMG—HCG方案。
(2)采卵:在確定的時間采卵。采卵的途徑有:①剖腹直視下穿刺卵泡取卵。②經(jīng)腹腔鏡取卵。③B超引導下經(jīng)腹壁、尿道膀胱或陰道穿刺取卵。目前多采用經(jīng)腹腔鏡或B超指引下經(jīng)陰道取卵,后者尤為方便。
(3)卵子培養(yǎng):吸出卵泡液后,立即尋找卵子。取出卵細胞后,置入裝有人工培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿內(nèi),并放入一定量的卵泡液,有助于卵細胞的生長發(fā)育。培養(yǎng)時間取決于所取卵泡的成熟度,成熟者一般培養(yǎng)2~6小時。
(4)體外授精:收集精液后應(yīng)用洗滌法使精液體外獲能,然后放入裝有卵細胞的培養(yǎng)液內(nèi),培養(yǎng)15~24小時,在解剖顯微鏡下檢查,如看到有兩個原核存在于卵母細胞原漿中表示已授精,再繼續(xù)培養(yǎng)36~42小時。當鏡下觀察到受精卵已分裂至4~8個細胞時,可考慮作胚胎移植。
(5)胚胎移植:陰道及宮頸用生理鹽水清潔再用培養(yǎng)液擦洗,將金屬或塑料導管置入頸管內(nèi)。另一助手在顯微鏡下用1.3mm的聚四氟乙烯管從培養(yǎng)液內(nèi)吸出胚胎細胞加吸0.03~0.05ml 培養(yǎng)液或0.03~0.05ml受試者血清,將此管插入宮頸管導管內(nèi)放至距宮底0.5cm處,送胚胎入宮腔。胚胎移植后需臥床24小時,限制活動3~4天,接受黃體酮治療。移植后2周作β-GCG測定,如無妊娠情況,停用黃體酮。移植成功的妊娠屬高危妊娠予以監(jiān)護。